(1)准备工作。双峰驼精液的冷冻稀释液以安瓿稀释液为好。其配制方法为:取12%的煎糖溶液73%,卵黄20%,青霉素及链霉素各500~1000国际单位/毫升。如果精液以1∶(10~15)稀释,应加入50微克/毫升促性腺激素释放激素。甘油是在精液稀释平衡后以7%的比例1次加入。
单峰驼精液的冷冻稀释液配制分两步,第一稀释液为11%的乳糖80毫升,卵黄20毫升,第二稀释液为取第一稀释液95.5毫升,加甘油6毫升,即成为冻精稀释液。
(2)稀释。将精液与同温度的稀释液按稀释比例混匀,检查精子活力。
(3)平衡。将稀释后的精液在保温箱内逐渐降温。1小时内降低到10℃左右,然后放置在4℃冰箱内平衡4小时,加入甘油,检查精子活力,将精液在0℃~5℃下装入2毫升玻璃安瓿或塑料细管中。
(4)冷冻。采用液氮熏蒸法。第一步,在-5℃的环境下,让精液在距液氮表面3厘米的距离持续3分钟;第二步,在-75℃的环境下,让精液在距液氮表面2厘米的距离持续2分钟;第三步,在-175℃的环境下,让精液在距液氮表面1厘米的距离持续1分钟;最后一步,在-196℃的环境下,让精液在液氮中持续3分钟。
(5)解冻。安瓿冻精可在45℃~50℃的温水中解冻,待精液融化后立即取出备用。
解冻后的冻精,其精子的活力不得低于30%,但经过上述方法配制成的冻精,解冻后的活力平均为60%左右。
(6)冷冻精液的保存。为了保证冷冻精液的质量,防止制备好的冻精活力降低,在贮存及取用过程中必须注意以下事项:
其一,根据液氮罐保温性能的要求,定期添加液氮,罐内的精液不应露在液氮面外。一般来说,液氮量不够容量的1/3时,就要添加。
其二,从液氮罐内取出冷冻精液时,其余分装的冷冻精液不应提出液氮罐口外。其三,在定期清理液氮罐时,或将精液转移到另一液氮罐时,动作要越快越好,精液在空气中暴露的时间不得超过3~5秒。