一、工艺流程
外植体接种→外植体生长与分化→试管苗继代增殖培养→试管苗复壮→试管苗生根→炼苗→试管苗移栽
二、选材及灭菌
外植体选择与消毒：选取幼嫩叶片，饱和洗衣粉水刷洗后在自来水下冲洗2h，在超净工作台上，将其放入广口瓶中，75%酒精消毒45s～1min→无菌水冲洗4次～5次→用0.1%氯化汞溶液消毒5min～6min→无菌水冲洗4次～5次→待接种。
三、培养条件
外植体启动培养及培养基：MS+6-BA0.3mg/L+IAA0.1mg/L
将消毒后的外植体接种于外植体培养基上，加瓶盖，放入培养室培养。在25℃左右，每天光照10h、光强160μmol·m-2·s-1的培养条件下（芽转绿后根据需要进行补光），诱导腋芽萌生。接种1周后，芽逐渐膨大，待分化培养。
分化培养基及培养条件：温度24℃～26℃，120μmol·m-2·s-1～160μmol·m-2·s-1光照条件下，光照时间10h/d～14h/d。培养基：MS+6-BA0.8mg/L+IAA0.1mg/L。pH值均调至6.2，蔗糖3%，琼脂0.6%，培养约1个月转入继代培养。继代的时间不能太长，应为3周，继代时可剪去叶片上部将基部插入培养基中。
生根培养及培养基：将分株或小丛接种在生根培养基中诱导生根。
MS+NAA0.1mg/L，培养介质pH值为6.2，需要透气好的培养瓶，谨防玻璃苗或畸形苗的出现，通过改善培养条件来调节。生根苗标准：株高2cm～3cm，具有3片～4片完全展开叶，叶色浓绿。
四、试管苗的炼苗和移栽
试管苗70%生根，株高3cm～4cm，根长0.1cm～0.5cm，茎粗1.5mm～1.8mm，具有4片～5片完全展开叶，叶色绿即进行炼苗。炼苗时间7d～10d，环境要求温度为20℃～28℃，湿度50%～60%，光照强度240μmol·m-2·s-1～400μmol·m-2·s-1。
将合格的试管生根苗置温室炼苗1周，注意遮阳，做好基质配比及基质消毒工作。在试管苗移栽车间内，采用全光照自动喷雾设施控制湿度。试管苗移栽培育周期35d～40d。新几内亚凤仙基质种类配比为草炭∶珍珠岩∶蛭石为3∶1∶1。基质消毒处理：杀菌剂500倍～700倍浓度。
移栽方法：将试管苗从瓶中取出，清洗掉培养基等物，栽植在穴盘基质中，栽植深度1cm并与基质紧密结合。随即喷施杀菌剂，新几内亚凤仙光照强度560μmol·m-2·s-1以下。栽植完毕，喷水，使植株与基质结合紧密，随即喷施杀菌剂，同时要注意空气保湿80%～85%，每天中午喷水1次～2次，如此管理7d～10d，生新根为1.0cm～1.5cm后，试管苗出瓶，用多菌灵或百清菌1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，可防治病害的发生。幼苗定植后用喷壶浇1次透水，空气相对湿度60%～80%为宜，环境温度15℃～20℃，可追施稀薄的液肥0.2%的磷酸二氢钾，7d～10d1次，20d～25d揭膜，50d～60d成苗出圃，直接定植大田。
【思考题】
1.如何进行生根苗的驯化和移栽？
2.试管生根苗炼苗期间需注意什么？如何掌握炼苗时间和标准？
